பரம்பரை நோய்களைக் கண்டறிவதற்கான மூலக்கூறு மரபணு முறைகள்

DNA தொழில்நுட்பம் முறைகள் பரம்பரை நோய்கள் சில குறிப்பிட்ட வகையான தோற்றம் பொறுப்பு விகாரி மரபணுவின் ஒரு குறிப்பிட்ட குரோமசோமில் பரவல் தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படுகின்றன. டிஎன்ஏ முதல்நிலை அமைப்பு சேதம் (ஒரு பிறழ்வு பொருட்படுத்தாமல் தோன்றும் இடத்தையும், தனிப்பட்ட நம்பகத்தன்மையை மீது செல்வாக்கு டிஎன்ஏ காட்சியில் எல்லா மாற்றங்களையும், புரிந்து) எனில் அனுவவத்தைத் நோயாளி குரோமோசோம்கள் ஏற்பாடுகளை மரபுரிமை ஆய்வு நோய், நிறுவ முடியும் - மரபணுவானது டிஎன்ஏ பிரிவிற்கும், மரபணு பிறழ்வு என்பதால் நோயியல் மரபணுவின் பரவல். மூலக்கூறு மரபியல் முறைகள் மாறிய டிஎன்ஏ கட்டமைப்பில் உள்ள நோய்கள் கண்டறிவதற்கு சாத்தியம் உருவாக்க, அவர்கள் மரபுவழி சீர்குலைவுகளுக்கும் ஓரிடத்திற்குட்பட்ட அறிந்துகொள்ள அனுமதிக்கும். மூலக்கூறு மரபணு முறைகள் கூட ஒரே மாதிரியை மாற்றுவதில் தொடர்புடைய பிறழ்வுகளை வெளிப்படுத்தலாம்.

ஒரு மரபணு அடையாளம் காண்பதில் மிக முக்கியமான கட்டம் அதன் தனிமை. டிஎன்ஏ எந்த வகை திசு மற்றும் கருக்கள் கொண்ட செல் இருந்து தனிமைப்படுத்தப்படலாம். டிஎன்ஏ தனிமைப்பட்டு படிகள் செல்லுலார் உள்ளுறுப்புகள் மற்றும் மென்படலங்களின், புரதங்கள் பொருள்களின் நொதி அழிவு மற்றும் எத்தனாலிலான வீழ்படிதலால் பினோலில் மற்றும் குளோரோபார்ம், டிஎன்ஏ செறிவுள்ள தீர்வு இருந்து தங்கள் பிரித்தெடுத்தல் துண்டுகள் அகற்றியது குறித்த மைய விலக்கல் மூலம் உயிரணுக்களின் விரைவான சிதைவு அடங்கும்.

டிஎன்ஏ மரபணு ஆய்வகங்கள் நோயாளிகள் ஒரு ஆன்டிகோவாகுலன்ட் (ஹெப்பாரினை) ஒரு தீர்வு ஒரு மலட்டு குழாயில் 5-20 மில்லி நாளக்குருதி கொண்டு செல்லப்பட்டு மிகவும் இரத்த லூகோசைட் ஒதுக்கிவைக்கப்பட்டுள்ளன. லுகோசைட்டுகள் பின்னர் மேற்கூறிய படிநிலைகளுக்கு ஏற்ப பிரிக்கப்பட்டன மற்றும் செயலாக்கப்படுகின்றன.

ஆய்வின் பொருள் தயாரிப்பு அடுத்த கட்டம் - கட்டுப்பாடு endonucleases (கட்டுப்படுத்தும் நொதிகளைப்) - கண்டிப்பாக குறிப்பிட்ட அடிப்படை வரிசை தளங்களில் டிஎன்ஏ "கட்" துண்டுகளாக பாக்டீரியா நொதிகள் மூலம் செய்யப்படுகிறது. கட்டுப்படுத்தும் நொதிகளைப் இரட்டை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ மூலக்கூறு மற்றும் கட்டுப்படுத்தும் தளங்கள் எனப்படும் அதனுடைய மொழிமாற்றம் இந்த தொடர்களின் துண்டுகளாக பிரிக்கப்பட்ட தளங்களில் 4-6 குறிப்பிட்ட தொடர்கள், குறைந்தது 8-12 நியூக்ளியோடைட்கள் அங்கீகரிக்க. அசல் டி.என்.ஏ மூலக்கூறின் நீளத்தில் இந்த தளங்களில் விநியோகம் தன்மை - டிஎன்ஏ தயாரித்தது; கட்டுப்பாடு துண்டுகள் அளவு கட்டுப்பாடு தளங்கள் மற்றும் துண்டுகள் நிகழ்வு அலைவெண்ணை சார்ந்ததாகும். பெரும்பாலும் கட்டுப்பாட்டு தளங்கள் அமைந்திருக்கின்றன, கட்டுப்பாட்டிற்குப் பிறகு டி.என்.ஏ துண்டுகள் குறைவாக உள்ளன. தற்போது பாக்டீரியா தோற்றம் கட்டுப்படுத்தும் நொதிகளைப் 500 ற்கும் மேற்பட்ட பல்வேறு வகையான உள்ளன, இந்த நொதியின் ஒவ்வொரு நியூக்ளியோடைட்களின் அதன் குறிப்பிட்ட வரிசை அங்கீகரிக்கிறது. எதிர்காலத்தில், டி.என்.ஏ க்கான மரபணு மார்க்கர்களாக கட்டுப்பாட்டு தளங்களைப் பயன்படுத்தலாம். விளைவாக டிஎன்ஏ கட்டுப்பாடு துண்டுகள் agarose அல்லது polyacrylamide கூழ்க்களிமங்கள் உள்ள நீளம் வாரியாக முடியும் மின்பிரிகை மூலம், இதனால் அவற்றின் மூலக்கூறு எடை தீர்மானிக்கப்படுகிறது. பொதுவாக குறிப்பிட்ட நிறிமிடு பயன்படுத்தப்படும் ஜெல் டி.என்.ஏ இன் கண்டறிதல் (பொதுவாக ethidium புரோமைடின்) மற்றும் அனுப்பப்படுகின்றன உள்ள ஜெல் பார்ப்பதற்காக புற ஊதா ஒளி. டி.என்.ஏ. பரவல் இடங்களின் சிவப்பு நிறம் உள்ளது. இருப்பினும், பல்வேறு டிஎன்ஏ கட்டுப்பாடு செயலாக்க ஒரு நபர் அவர்கள் மின்பிரிகை பிரிந்து சென்றிருக்கிறது முடியாமல் இருந்த பல்வேறு நீளம் பல துண்டுகள் உருவாக்கப்பட்டது endonucleases, அது பார்வை (ஜெல் நீளம் முழுவதும் உற்பத்தி சீருடை நிறத்தை) electrophoregram தனிப்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டுகள் அடையாளம் முடியாது. எனவே, பெயரிடப்பட்ட டி.என்.ஏ ஆய்வுகள் கொண்ட கலப்பின முறை, விரும்பிய டி.என்.ஏ துண்டுகள் போன்ற ஒரு ஜெல்லில் அடையாளம் காணப் பயன்படுகிறது.

ஒற்றை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்.என்.ஏ எந்த பிரிவில் குவானைன் எப்போதும் cytosine, தைமினுடன் அடினைன் தொடர்புடையதாக உள்ளது, அதன் நிரப்பு சங்கிலி கொண்டு (கலப்பியலுக்கு) பிணைக்க முடியும். இது இரட்டை சங்கிலியால் உருவாக்கப்பட்ட மூலக்கூறின் உருவாக்கம் ஆகும். க்ளோன் செய்யப்பட்ட மரபணு ஒரு ஒற்றை கைப்பிடி நகல் ஒரு கதிரியக்க முத்திரை பெயரிடப்பட்டால், ஒரு ஆய்வு பெறப்படும். ஆய்வு டி.என்.ஏவின் முழுமையான பகுதியை கண்டுபிடித்து, பின்னர் வானொலிகளால் எளிதில் அடையாளம் காணப்படுகிறது. கதிரியக்க ஆய்வு மருந்து நீட்டி குரோமோசோம்கள் சேர்க்கப்படும் ஒரு டிஎன்ஏ ஆய்வு மூலம் ஒரு குறிப்பிட்ட நிறமூர்த்தங்கள் மரபணு நிலைநிறுத்துவதற்கும் ஒரு தென்னக கறையாக சில பகுதிகள் அடையாளம் அனுமதிக்கிறது. டி.என்.ஏவின் சோதனைப் பகுதி சாதாரண மரபணுவைக் கொண்டிருப்பின், கலப்பினம் ஏற்படுகிறது. நியூக்ளியோடைட்களின் ஒரு அசாதாரண வரிசை அங்கு வழக்கில், அதாவது தொடர்புடைய குரோமோசோம் அமைப்புகள் அசாதாரண மரபணுவின் பரவல் தீர்மானிக்க உதவும் மரபணுவிற்குள்ளாக கலப்புப்பிறப்பாக்கல், ஏற்படும் மாட்டேன் கொண்டிருக்கின்றன.

DNA ஆய்வுகள் பெற, மரபணு குளோனிங் முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. முறை சாரம் குளோனிங் துகள், பொதுவாக ஒரு பாக்டீரியா பிளாஸ்மிட்டாக செருகப்பட்ட மரபணுவின் எந்த மரபணுவையும் அல்லது பிராந்தியத்திற்கு தொடர்புடைய டி.என்.ஏ. துண்டு (நுண்மை செல்களில் வட்ட extrachromosomal டிஎன்ஏ தற்போதைய மற்றும் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மரபணுக்கள் சுமந்து), பின்னர் பாக்டீரியாவில் கொண்டுள்ளது உள்ளமைக்கப்பட்ட மனித மரபணுடன் ஒரு பிளாஸ்மிட் இருப்பதால், அவை பெருக்கப்படுகின்றன. காரணமாக தொகுப்பு செயல்முறைகள் அது மனித மரபணு அல்லது அவற்றின் பகுதிகளை பிரதிகளை பிளாஸ்மிட்டாக பில்லியன் பெறுவது சாத்தியம்தான்.

மேலும், டி.என்.ஏ மூலக்கூறுகள் குழுவில் உள்ள பூரணமான காட்சிகளைப் பரிசோதிப்பதற்கு டி.என்.ஏ பிரதிகளை ஒரு கதிரியக்க முத்திரையுடன் அல்லது ஃப்ளோரோக்ரோமாஸ் மூலம் பெயரிடப்பட்ட ஆய்வுகளாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

தற்போது, டி.என்.ஏ ஆய்வுகள் மூலம் மரபணு மாற்றங்களின் ஆய்வுக்கு பல வகை முறைகள் உள்ளன.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],